Production d’embryons in vitro (PIV)
La production d’embryons in vitro (PIV)
La fécondation des ovules au microscope puis la culture des embryons dans l’incubateur exigent un travail précis et hygiénique.
Optiline – pour vaches favorites
- En moyenne environ 4 embryons
- Taux de gestation de 60 %
- Veaux avec un potentiel de commercialisation élevé
- Raccourcissement de l’intervalle entre les générations
- Fonctionne avec de la semence sexée (seleXYon)
Explications des termes
Les différentes étapes de ce processus sont désignées au niveau international par des abréviations anglaises similaires, mais néanmoins différentes. Cela crée parfois de la confusion dans la communication.
Aperçu des dénominations et abréviations des différentes étapes de travail de la PIV
| Activité | Dénomination anglaise | Abréviation |
| Prélèvement des ovules sur l’ovaire de la donneuse | Ovum Pick Up | OPU |
| Maturation des ovules dans le milieu de maturation | In vitro maturation | IVM |
| Fécondation des ovules au microscope | In vitro fertilisation | IVF |
| Culture des embryons à un stade précoce dans l’incubateur | In vitro culture | IVC |
| Processus global de production d’embryons en laboratoire | In vitro production | IVP |
OPU
Les ovules sont aspirés des ovaires de la donneuse à l’aide d’une fine aiguille et cela se fait sous contrôle échographique.
Qualité des ovules
Lors de l’aspiration, les ovules et surtout les cellules nourricières disposées en forme de nuage (cellules cumulus) doivent rester intacts.
Recherche au microscope
Les ovules sont recherchés au microscope directement après le prélèvement.
Contrôle visuel de la qualité
Le cumulus intact composé des cellules nourricières autour de l’ovule est un critère de qualité.
Taux de récupération
La comparaison entre le nombre de follicules ponctionnés sur l’animal et le nombre d’ovules trouvés au microscope sert de critère de contrôle.
Protection des ovules utilisables
Les ovules dégénérés ou ceux dont le cumulus est endommagé doivent être éliminés le plus rapidement possible. Ils exerceraient une influence négative sur les bons ovules.
Dans le milieu de maturation
Les ovules de bonne qualité sont transférés dans un milieu de transport et de maturation (maturation in vitro).
Transport vers le laboratoire PIV
Les ovules se conservent sans problème pendant 24 heures à 38°C dans le milieu de transport. Ils y mûrissent pour pouvoir ensuite être fécondés.
Conditions de réussite de la FIV
La fécondation en laboratoire nécessite un travail minutieux, un processus structuré et bien réglé, des conditions standardisées et un grand savoir-faire.
Conditions dans le laboratoire FIV
Les conditions environnementales du laboratoire sont également importantes pour une production d’embryons couronnée de succès. En effet, les ovules sont très sensibles à la lumière et à la température.
Obscurité
Voici comment nous procédons chez Swissgenetics
«Nos laboratoires sont sombres. Les seules sources de lumière sont l’éclairage du microscope et une petite lampe supplémentaire pour éviter que l’on trébuche dans le laboratoire.»
Chaleur
Voici comment nous procédons chez Swissgenetics
«Le laboratoire FIV de Mülligen, ainsi que le petit laboratoire d’Anet, sont constamment chauffés à une température estivale de 29°C.»
Un air propre et sec
Voici comment nous procédons chez Swissgenetics
«A Mülligen, nous avons une installation de ventilation complexe. Elle renouvelle l’air 15 fois par heure, le filtre et le purifie. Le taux d’humidité de l’air dans le laboratoire doit être extrêmement faible.»
Absence de germes
Voici comment nous procédons chez Swissgenetics
«Nous portons un masque respiratoire et une blouse de laboratoire à longues manches – et nous nous lavons les mains 100 fois par jour. De plus, le laboratoire est doté d’un revêtement de sol spécial qui ne se charge pas en électricité statique.»
Déroulement de la FIV
Préparation des milieux
Prélèvement des ovules
Rinçage des ovules mûrs
Dans un milieu de fécondation
Décongélation de la semence
Préparation des spermatozoïdes
Centrifugation de la semences
Analyse de la semence
Des spermatozoïdes vitaux
Prélèvement des spermatozoïdes
Des spermatozoïdes aux ovules
Spermatozoïdes et ovules
Accouplements flexibles
Lors de chaque cycle de ponction, il est en principe possible d’utiliser différents taureaux de manière flexible.
La fécondation avec de la semence sexée est également possible.
Maturation des spermatozoïdes
Seuls les spermatozoïdes matures peuvent féconder l’ovule. Cette «capacitation» se produit normalement dans les trompes de Fallope de la vache. En laboratoire, des conditions identiques sont reproduites. Fait intéressant: chaque taureau a besoin de conditions différentes pour que ses spermatozoïdes fécondent au mieux.
En route pour l’incubateur…
Les ovules et les spermatozoïdes sont ensuite placés dans un incubateur. Les cellules sensibles ont besoin de conditions contrôlées pour que la fécondation ait lieu.
Le lendemain – jour J + 1
Après 24 heures, les ovules sont transférés dans un nouveau milieu de culture. Les cellules cumulus qui enveloppaient l’ovule sur l’ovaire sont alors éliminées, ainsi que les spermatozoïdes excédentaires. On simule ainsi les conditions naturelles.
Jour J + 4
Après quatre jours, on peut voir si les cellules fécondées se sont divisées ou non au cours des derniers jours. Les cellules qui n’ont encouru aucune division cellulaire peuvent être éliminées.
Après une semaine – jour J + 7
Une semaine après la fécondation et après de nombreuses divisions cellulaires, les embryons atteignent le stade de blastocyste. Les embryons bovins issus de la FIV sont congelés à ce stade de développement.
Notre recommandation
Que signifie «Division cellulaire au début du développement embryonnaire»? Une vidéo en accéléré de l’EPF de Zurich le montre. A la fin de cette vidéo, le blastocyste éclot finalement de son enveloppe.
Au laboratoire PIV, les embryons sont toutefois congelés ou transférés juste avant.
Congélation ou transfert
Comme les embryons issus de la collecte d’embryons conventionnelle, les embryons PIV peuvent être stockés dans l’azote liquide, puis être transférés plus tard sur une receveuse appropriée. Si des receveuses sont prêtes, les embryons PIV peuvent être transférés frais, comme les embryons conventionnels.
Avantages de la PIV pour la production d’embryons
Par unité de temps, il est possible de réaliser davantage d’accouplements intéressants avec une donneuse individuelle. On peut donc qualifier la PIV de «plus efficiente» que la production conventionnelle d’embryons par rinçage.
Notre recommandation
Boviteq, l’organisation partenaire canadienne de Swissgenetics, est le leader mondial en matière de production d’embryons PIV. Vous trouverez ici les réponses aux questions fréquemment posées sur la production in vitro;
Récolte d'ovules – Ovum Pick Up (OPU)
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Découvrez la récolte d’ovules sur animal vivant : étape clé pour la FIV et la reproduction assistée.
Transfert d’embryon
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